Який ліміт виключення?

Ліміт виключення визначається як об'єм елюції (час утримання), коли велика молекула проходить через пори, не потрапляючи в них взагалі. Межа проникнення – це об’єм елюювання, оскільки невелика молекула проникає в усі пори та елюює.

У SEC обмеження виключення становить молекулярна маса на верхній межі робочого діапазону колонки, за межами якого молекули є занадто великими, щоб потрапити в стаціонарну фазу, і будуть разом елююватися в порожній об’єм колонки. Багато упаковок SEC називаються обмеженнями виключення.

Діапазон фракціонування для глобулярних білків становить від Mr 1000 до 5000, з межею виключення приблизно пан 5000. Це забезпечує групове відокремлення білків/пептидів розміром понад Mr 5000 від молекул з молекулярною масою менше Mr 1000.

Розмір називають «лімітом виключення», що означає молекули вище певної молекулярної маси не помістяться в тунелі. Молекули, розміри яких перевищують межу виключення, не потрапляють у тунелі й відносно швидко проходять крізь колонку, проходячи між кульками.

Мінімальний розмір, який залишиться в рухомій фазі і не перейде в стаціонарну фазу, відомий як межа виключення. Bio-Rad пропонує середовища та колонки для гель-фільтраційної хроматографії з межами виключення, що перевищують три порядки величини, від від 100 дальтон до 100 000 дальтон (100 кДа).

Ліміт виключення визначається як об'єм елюції (час утримання), коли велика молекула проходить через пори, не потрапляючи в них взагалі. Межа проникнення – це об’єм елюювання, оскільки невелика молекула проникає в усі пори та елюює.