Це класична техніка, яка передбачає розділення фрагментів ДНК за розміром за допомогою електрофорезу, перенесення їх на мембрану,
з міченим зондом, специфічним для послідовності, промиванням і, нарешті, виявленням міченої смуги ДНК.
Південно-західний блот – це техніка, яка використовується для вивчення взаємодії ДНК-білок. Цей метод виявляє специфічні ДНК-зв'язувальні білки інкубація радіоактивно міченої ДНК за допомогою гелевої плями, промивання та візуалізація за допомогою авторадіографії.
У методах блотінгу перенесення молекул залежить від дифузія білків з гелевої матриці та поглинання на перехідну мембрану. Коли поглинені білки «видаляються» з розчину, це допомагає підтримувати градієнт концентрації, який спрямовує білки до мембрани.
Отже, Саузерн-блот вимагає всього вищезазначеного (зонди, агарозний гель і нітроцелюлозна мембрана).
Передача фрагментів ДНК до 15kb займає близько 18 годин. Після завершення перенесення помістіть блот в УФ-зшивальник на автоматичних налаштуваннях. УФ-зшивання виконується для ковалентного зв’язування ДНК або РНК з нейлоновою мембраною, що посилює сигнали гібридизації під час виявлення.
Покроковий посібник із Саузерн-блот-аналізу
- Крок 1 Розщеплення ДНК.
- Крок 2 Гель-електрофорез.
- Крок 3 Промокання.
- Крок 4. Маркування зонда.
- Крок 5 Гібридизація та промивання.
- Крок 6 Виявлення.